Taitool神经元跨突触顺标方案

1、WGA-Cre

wheat-germ agglutinin 小麦凝集素蛋白，在神经元中表达后有跨突触的能力。偶联Cre蛋白的WGA，会携带Cre同时跨突触从而标记上下游神经元。

优点：可实现细胞特异上下游标记。

缺点：在一些环路中效果不佳，上下游均有可能标记。

实验方案：

在上游注射WGA-Cre病毒（滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右），下游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）

2、AAV1

1型腺相关病毒有一定的向下游标记的能力，虽然这种能力较弱，但足以表达一定量的Cre等重组酶，诱导下游基因的表达。

优点：效率较高，目前用过的实验室基本都认可它的顺向标记能力。

缺点：表达较弱，只能用于表达重组酶，由于要求病毒滴度较高，注射区域有一定毒性。目前使用的规模还较小，不清楚是否所有环路都适用。

实验方案：在上游注射AAV1（滴度0.7~1.5E+13VG/mL，体积200nl左右），下游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）

3、scAAV1 (泰儿图独有，合作文章在发表中)

scAAV是self-complementary AAV的缩写，它是一种自互补的AAV，由于它的基因组本身就是双链的，所以它的表达时间更快，效率更高。

优点：能够在下游直接表达荧光基团等功能基因。

缺点：载体容量小，滴度低（一般大于5E+12VG/mL）。

实验方案1：在上游注射scAAV1（滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右），下游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）。

实验方案2：在上游注射scAAV1（滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右），下游直接观察或者注射Cre，诱导scAAV1携带的DIO-GOI表达。

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